Primjena Gene Gun u razvoju voća

Trešnja je plod koji je relativno ovisan o klimi. Tijekom razvoja voća, njegovo sazrijevanje regulira apsisična kiselina (ABA).

U ovoj studiji, za identifikaciju četiriju cDNA koje kodiraju 8'-hidroksilazu (ključni enzim za oksidativni katabolizam ABA) u plodovima trešnje, korišteni su virusno utišavanje gena (VIGS) i metoda bombardiranja česticama. Deoksiribonukleinska kiselina) Paccyp707a1-a4

Paccyp707a2 negativno regulira dozrijevanje plodova trešnje, a paccyp707a1 posreduje toleranciji na sušu

Virusno inducirano utišavanje gena (VIGS) odnosi se na virus koji inficira biljku koja nosi fragment ciljnog gena, koji može inducirati utišavanje endogenog gena, uzrokovati fenotipske promjene, a zatim proučavati funkciju ciljnog gena na temelju fenotipske varijacije.

Slika 1. Promjene u biosintezi ABA (pacnced1), ABA katabolizma (paccyp707as) i srodnih gena ABA tijekom razvoja i sazrijevanja plodova trešnje. (a) Apsolutne razine transkripta od četiri pacyp707as tijekom razvoja voća. (b) Relativne razine transkripta akumulirane pcnced1 i aba tijekom razvoja. Actin je korišten kao unutarnja kontrola i njegova ekspresija je detektirana pomoću qrt-pcr.

Ekspresija gena pAccyp707a u reakciji dehidracije

Plodovi prikupljeni u 32 dana podijeljeni su u dvije skupine, a brzina gubitka vode 16% pri 45% relativne vlažnosti nakon skladištenja 3 dana u uvjetima niske relativne vlage (45%) i visoke relativne vlažnosti (100%). Sadržaj ABA i razina transkripcije pNCED1 u plodovima bili su značajno viši od onih u kontrolnoj skupini. On kontrolira (Slika 2). Nasuprot tome, ekspresija Paccyp707a1 bila je značajno smanjena nakon dehidracije, a ekspresija Paccyp707a3 također je bila smanjena, iako u manjoj mjeri, a ekspresija Paccyp707a4 i Paccyp707a2 nije bila pod utjecajem dehidracije (Slika 2). Najznačajnija promjena dogodila se u ekspresiji paccyp707a1, koja može biti glavni član obitelji paccyp707a koji reagira na sušu tijekom zrenja ploda.

Utišavanje gena za Paccyp707A2 potiče bojenje i sazrijevanje ploda

Fenotip ploda je tretiran s Paccyp707A1 / 2-RNAi. Na 28. dan nakon cvjetanja, odabrano je 90 plodova od tri trešnje posađene u odvojenim voćnjacima, a podijeljene su u tri skupine od po 30 za eksperimente koji utječu na virus koji je izazvao virus.

Paccyp707a1-rnai, paccyp707a2-rnai i kontrolni trv vektor (bez gena cyp707a) su ubrizgavani u pedikele plodova skupina 1, 2 i 3, redom.

Plod je procijenjen 7 dana nakon inokulacije.

(a) tretiranje voća (d) 28 dana nakon cvatnje;

(b) 43d za liječenje ploda;

(c) 43d trv vektorski tretman voća (bez cyp707a gena);

(d) 43 d voća koje su tretirane pacyp707a1 RNAi;

(e) paccyp707a2 RNAi obrada voća;

(f) Paccyp707a2 RNAi obrađeni plod 6 dana nakon tretmana (desna kontrola);

(g) paccyp707a1 RNAi 6 dana nakon tretmana voća (kontrolni plod desno).